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     韓國科(ke)學家Mohammad Nazrul Islam等先前開發了一步(bu)測序(xu)和(he)無連接(jie)酶克隆（SLIC）的(de)方(fang)法，它簡單、快速并且(qie)成本低(di)。盡管(guan)SLIC方法通常作用效果很好，但是有(you)時候它(ta)的克隆效率很低，可(ke)能是由于T4 DNA聚合酶(mei)室溫處(chu)理2.5min時導致(zhi)單(dan)鏈DNA區域(yu)形成穩定的二(er)級(ji)結構。為(wei)了克(ke)服(fu)這個問題，通(tong)過(guo)檢測(ce)較短(duan)T4 DNA聚合酶(mei)在很寬溫度范圍(wei)內（25℃-75℃）的(de)持續(xu)處(chu)理時間（5s-2.5min），韓國科(ke)學家Mohammad Nazrul Islam等開(kai)發(fa)了一(yi)種改進的熱調節SLIC方法。當插(cha)入的(de)同源片(pian)段小于20bp，然后用T4 DNA聚合酶在50度(du)處理30s，這樣(yang)的克隆效率zui高(gao)。較高(gao)的溫度下(xia)，這種較短(duan)的T4聚合(he)酶幫助增(zeng)加其兩端插入(ru)強二級結構的DNA的(de)克隆效(xiao)率，增加短片段克隆的(de)SLIC的效率(lv)。

原文：

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).