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SMOBIO蛋(dan)白marker FA Q

Q，如(ru)何選(xuan)擇(ze)適合的產品？

SMOBIO 蛋白marker 分子量(liang)范(fan)圍廣、條帶清晰銳利

PM2510符合(he)大多(duo)數(shu)使用者(zhe)需求

小(xiao)分(fen)子選PM2700

大分子選(xuan)PM2800

Q，為何大(da)分子條帶會(hui)消失不見

跑膠(jiao)緩沖液遭受蛋白酶(proteinase) 污染，或(huo)是(shi)buffer reuse 太多次，導致長(chang)菌以致于有proteinase 存在，或是上(shang)樣時反復使用同一支 tip。

                                           受到污染后(hou)蛋白會從(cong)大分子開(kai)始降(jiang)解

解決辦法:

1.  上樣時使用避免反復使用同一支Tip。

2.  內槽(cao)使用(yong)新(xin)鮮(xian)配(pei)置的跑膠緩沖液。

Q，為何轉(zhuan)膜后條帶會歪斜(xie)或消失不見(jian)？

膠體(ti)與膜(mo)之間未緊貼，膠體(ti)與膜(mo)之間仍有緩沖(chong)液

模擬試驗: 轉膜裝置未緊貼

解決辦法:

1.   增加filter paper 張數(或厚度)à上下(xia)各三張

2.   使用滾輪膠體與膜之間氣(qi)泡或緩沖液趕走

3.   更換新(xin)的海綿墊

Q,為何(he)轉膜后(hou)高分子(zi)條帶(dai)消失？

1. >100KDa高分子量蛋白會需要比較長的(de)轉膜時間及較高的(de)電壓

2. 緩沖(chong)液重復使用太多次或組成不(bu)正確，建議使用新(xin)鮮配制的緩沖(chong)液

3. 轉(zhuan)膜液體可添加0.01?0.1％SDS以促(cu)進(jin)高分子量蛋白質的轉移(yi)

在正(zheng)確轉膜(mo)條件下，10-310kDa在轉膜后都(dou)是清(qing)晰(xi)可見(jian)的狀態

Q,為何小分子(zi)條帶 (<5kDa) 會跑(pao)不出來？

條帶在不同緩沖溶液系統、不同濃度會有不一樣的分布 (如下圖)，

須根據需求來(lai)選擇(ze)膠的(de)濃(nong)度或(huo)挑選適合的(de)緩(huan)沖(chong)溶液系統

? 若<10kDa分子分不開，建議使用MES buffer

? 若>100kDa分子分不開，建議使用MOPS buffer

Q,為何洗膜后條帶(dai)會變弱或不(bu)見(jian)

1. 洗膜液體中的(de)Tween20濃度過高 (建議(yi)使用(yong)0.05%~1%)

2. 洗膜轉速過高(建議使用25~50 rpm)