產品列表PRODUCTS LIST
免疫組化中抗體選擇要求
1、一抗選擇要點
(1)選擇單(dan)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)還是(shi)多(duo)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)。由(you)一(yi)(yi)種克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)產生的特(te)異性(xing)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)叫做單(dan)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti),單(dan)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)能目標明確(que)地(di)與單(dan)一(yi)(yi)特(te)異抗(kang)(kang)原決定簇結合,另(ling)一(yi)(yi)方面,即使是(shi)同一(yi)(yi)個抗(kang)(kang)原決定簇,在機體(ti)(ti)(ti)內(nei)也可以由(you)好(hao)幾種克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)產生抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti),形(xing)成好(hao)幾種單(dan)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)混雜(za)物,稱為多(duo)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)。在抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)反應中,一(yi)(yi)般(ban)單(dan)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)特(te)異性(xing)強(qiang),但親和力相對小,檢測抗(kang)(kang)原靈敏度(du)相對較低(di);而多(duo)克(ke)(ke)(ke)(ke)隆(long)(long)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)特(te)異性(xing)稍弱,抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的親和力強(qiang),靈敏度(du)高,但易出現非(fei)特(te)異性(xing)染色(可以通過封閉(bi)等有所避(bi)免)。
(2)種屬來(lai)源。一般家兔來(lai)源的抗(kang)體多是多克(ke)隆;而(er)小鼠來(lai)源的抗(kang)體多是單克(ke)隆,但也(ye)有另外。這(zhe)條主要(yao)要(yao)與后面的二抗(kang)來(lai)源相匹配(pei)。
(3)實驗目的是檢測什么(me)種屬(shu)的抗原,即species reactivity。這一點很重要,一般說(shuo)明(ming)書(shu)上(shang)都有(you)注明(ming),如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。
(4)能否做(zuo)(zuo)免(mian)疫(yi)組化。一般一抗說(shuo)明書(shu)都(dou)會注明做(zuo)(zuo)WB、IHC、ICC、IF等,建(jian)議選擇(ze)注明的抗體,因(yin)為(wei)一般都(dou)是經(jing)過(guo)文章證明。
(5)檢測標本類型。用于檢測石(shi)蠟(la)(la)切(qie)片(pian)還是冰(bing)凍切(qie)片(pian),一般能(neng)做石(shi)蠟(la)(la)切(qie)片(pian)的(de)抗體(ti),可能(neng)都可以用來檢測冰(bing)凍切(qie)片(pian),但能(neng)做冰(bing)凍切(qie)片(pian)的(de)抗體(ti),不一定能(neng)檢測石(shi)蠟(la)(la)切(qie)片(pian)中的(de)抗原。
(6)生(sheng)產(chan)廠(chang)家。我(wo)的經(jing)驗是國外抗體生(sheng)產(chan)商原裝抗體質(zhi)量(liang)一般沒問題,但(dan)有(you)點(dian)貴;而國內分裝廠(chang)家用的一抗工作液(ye),價格便宜(yi),但(dan)有(you)時結果的穩定性和重復性稍差,尤其不同批次(ci)重復性較差。
(7)價格與質(zhi)量(liang)的矛盾(dun)。我個人認(ren)為一(yi)(yi)抗原裝質(zhi)量(liang)可能會(hui)好點(dian),因為許(xu)多一(yi)(yi)抗避免反復凍融,且(qie)在稀釋液(ye)中穩(wen)定性較差(若時間長),但價格較貴。
2、二抗選擇要點
(1)種屬(shu)來(lai)(lai)(lai)(lai)源(yuan)(yuan)。主要根據一抗(kang)種屬(shu)來(lai)(lai)(lai)(lai)源(yuan)(yuan)來(lai)(lai)(lai)(lai)決(jue)定購(gou)買二(er)抗(kang)來(lai)(lai)(lai)(lai)源(yuan)(yuan),如(ru)一抗(kang)是小鼠來(lai)(lai)(lai)(lai)源(yuan)(yuan),那二(er)抗(kang)就買抗(kang)小鼠的即(ji)可(羊、兔等均(jun)可)。
(2)標記(ji)物(wu)的選擇(ze)。有(you)HRP、Biotin、熒(ying)光素等標記(ji)物(wu)。一般SP三步法二抗(kang)選擇(ze)Biotin標記(ji)的二抗(kang),以與后(hou)(hou)面的SP結合反應;而免疫熒(ying)光染色(se)就需要購買不同熒(ying)光素標記(ji)的二抗(kang),如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒(ying)光素。這主要與后(hou)(hou)面有(you)無三抗(kang)和三抗(kang)種類有(you)關。
(3)選(xuan)擇IgM還是IgG。一般一抗(kang)(kang)是IgM,那么(me)二抗(kang)(kang)就選(xuan)擇IgM;反之,一抗(kang)(kang)是IgG,則二抗(kang)(kang)選(xuan)擇IgG。