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從胰(yi)(yi)腺(xian)細(xi)胞(bao)中提(ti)取RNA具有一(yi)(yi)定(ding)的(de)挑戰(zhan)性,在這里(li),美國俄亥俄州立大學的(de)科學家(jia)Robert Szulawski等提(ti)出一(yi)(yi)種可(ke)重復的(de)方法(fa)(fa),該(gai)方法(fa)(fa)可(ke)以從嚙齒動(dong)物(wu)幼體胰(yi)(yi)腺(xian)細(xi)胞(bao)中獲得充足(zu)的(de)、高(gao)質量(liang)(liang)的(de)RNA,用(yong)(yong)于(yu)體外表達研(yan)究(jiu)。組(zu)織(zhi)(zhi)取自TLR3+/+和TLR3-/-的(de)雌(ci)性非(fei)肥胖型(xing)糖尿(niao)(niao)(niao)病(bing)老(lao)鼠(shu),該(gai)老(lao)鼠(shu)處于(yu)糖尿(niao)(niao)(niao)病(bing)前期階段。組(zu)織(zhi)(zhi)經液氮(dan)冷凍后(hou)切片(pian),將(jiang)組(zu)織(zhi)(zhi)切片(pian)固(gu)定(ding)在高(gao)濃(nong)度(du)的(de)酒精溶液中,并用(yong)(yong)含酒精的(de)甲酚紫(zi)溶液染(ran)色,再水化作用(yong)(yong)使得固(gu)定(ding)切片(pian)zui小(xiao)化。激光顯微切割(ge)系(xi)統Leica LMD6000 能夠(gou)從外形上識別胰(yi)(yi)腺(xian)細(xi)胞(bao),并從組(zu)織(zhi)(zhi)中捕獲高(gao)濃(nong)度(du)的(de)胰(yi)(yi)腺(xian)RNA樣品。用(yong)(yong)胰(yi)(yi)腺(xian)cDNA進行(xing)探(tan)針法(fa)(fa)實時定(ding)量(liang)(liang)PCR檢測CXC趨(qu)化因子配(pei)體10,該(gai)配(pei)體是(shi)一(yi)(yi)種炎癥(zheng)標記物(wu)可(ke)用(yong)(yong)于(yu)鑒定(ding)1型(xing)糖尿(niao)(niao)(niao)病(bing)。這一(yi)(yi)方法(fa)(fa)可(ke)作為顯微切割(ge)技(ji)術用(yong)(yong)于(yu)嚙齒動(dong)物(wu)胰(yi)(yi)腺(xian)細(xi)胞(bao)的(de)典型(xing)代表,采用(yong)(yong)此方法(fa)(fa)只需要(yao)少量(liang)(liang)的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)便(bian)可(ke)進行(xing)表達研(yan)究(jiu),且不需要(yao)進行(xing)RNA的(de)預擴增。利用(yong)(yong)非(fei)肥胖型(xing)糖尿(niao)(niao)(niao)病(bing)老(lao)鼠(shu)作為動(dong)物(wu)模型(xing)對于(yu)1型(xing)糖尿(niao)(niao)(niao)病(bing)的(de)研(yan)究(jiu)具有直接意義。
原文:
Robert Szulawski,Masato Nakazawa,Kelly D. McCall,Calvin B.L. James,and Frank L. Schwartz,Laser capture microdissection tailored to type 1 diabetes mellitus research,BioTechniques60: 293-298 (August 2016)