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熒光定量服務


熒光定量PCR的(de)基本(ben)原理就(jiu)是(shi)在PCR擴增(zeng)過程中(zhong)，隨著PCR循(xun)環(huan)數的(de)遞增(zeng)，PCR產(chan)物不斷積累(lei)，熒(ying)光信號(hao)也會相應的(de)增(zeng)加，這樣就(jiu)可以(yi)通過熒(ying)光強度的(de)變(bian)化來對(dui)PCR反應進行(xing)實時的(de)監(jian)測(ce)，并以(yi)b-Actin或GAPDH等(deng)管架基因作(zuo)為內參照，對(dui)目的(de)基因的(de)表(biao)達量進行(xing)半定量檢(jian)測(ce)。

科佰(bai)生物將根據您的(de)科研需求可(ke)以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針(zhen)法。通過對(dui)DNA或RNA的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR監測, 實現基因(yin)的(de)相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)、定(ding)量(liang)和定(ding)性分析。

SYBR Green熒光染料法：適用于任何DNA，無需(xu)設計探針(zhen)，采取雙標準曲(qu)線(xian)法(fa)，實驗(yan)周期(qi)短，結(jie)果重復性好，靈敏(min)度高。

TaqMan熒光探針法：經(jing)驗豐(feng)富的實(shi)驗技(ji)術人員設計探針，對目標基因有高特異性，實(shi)驗重復性好，相對于SYBR Green法(fa)，靈敏度更高。

1.定量：

定(ding)量首先必須構(gou)建與檢(jian)測樣品目的(de)(de)(de)(de)基因具有相同序列的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)準品。使用已知濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)準品制作3個點以(yi)上的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)準曲(qu)線后，可以(yi)使用標(biao)(biao)準曲(qu)線對(dui)未知濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)檢(jian)測樣品進行量（起始拷(kao)貝數）分析。

2.相對定量（mRNA表達量分析）：

基(ji)(ji)(ji)因(yin)表(biao)達(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)研究一般采用(yong)相(xiang)對(dui)(dui)定量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)。相(xiang)對(dui)(dui)定量(liang)法(fa)必須對(dui)(dui)樣(yang)(yang)品的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因(yin)和參(can)(can)比(bi)基(ji)(ji)(ji)因(yin)內標同時分別(bie)進(jin)行(xing)定量(liang)，然后求出對(dui)(dui)于(yu)參(can)(can)比(bi)基(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)對(dui)(dui)量(liang)。通(tong)過對(dui)(dui)樣(yang)(yang)品間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)對(dui)(dui)量(liang)進(jin)行(xing)比(bi)較，可以(yi)對(dui)(dui)不同樣(yang)(yang)品間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)mRNA進(jin)行(xing)表(biao)達(da)量(liang)分析(xi)。參(can)(can)比(bi)基(ji)(ji)(ji)因(yin)通(tong)常(chang)選(xuan)用(yong)表(biao)達(da)量(liang)相(xiang)對(dui)(dui)恒(heng)定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)House Keeping Gene，如：GAPDH、b-actin等。通(tong)過同時對(dui)(dui)參(can)(can)比(bi)基(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)實時檢(jian)測，可以(yi)對(dui)(dui)樣(yang)(yang)品之間由于(yu)起始(shi)細胞數(shu)不同、或RNA提取(qu)效(xiao)率的(de)(de)(de)(de)(de)(de)不同等造成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)RNA量(liang)誤(wu)差進(jin)行(xing)校正，達(da)到在(zai)嚴(yan)格意義上對(dui)(dui)樣(yang)(yang)品之間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)mRNA表(biao)達(da)量(liang)進(jin)行(xing)分析(xi)之目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。

1、總 RNA 提取(qu)及(ji)定(ding)量；

2、PCR 引物設計及反轉錄；

3、熒光(guang)引物設計（SYBR Green 熒光(guang)染料法(fa)）/探(tan)針(zhen)設計（TaqMan 熒光(guang)探(tan)針(zhen)法(fa))；

4、熒光定量(liang)PCR，進行擴增曲線(xian)、溶解(jie)曲線(xian)、表達量(liang)差異分析等實驗；

5、數據分析與處理；

6、完整實驗報告。

樣品要求：

1.樣(yang)品可(ke)提供(gong)(gong)組織(zhi)、細(xi)胞(bao)、RNA、cDNA中的(de)一種,對(dui)(dui)于提供(gong)(gong)樣(yang)本(ben)的(de)大(da)致(zhi)原則如(ru)(ru)下：組織(zhi)樣(yang)本(ben),盡可(ke)能提供(gong)(gong)2×2×2mm3體積或以上,新鮮組織(zhi)可(ke)直接提供(gong)(gong)，不需(xu)處(chu)理；對(dui)(dui)于細(xi)胞(bao)樣(yang)本(ben)，盡可(ke)能提供(gong)(gong)3×10^6個細(xi)胞(bao)左(zuo)右(you),加適量(liang)(liang)Trizol處(chu)理即可(ke)，確保樣(yang)品適于RNA抽提。RNA、cDNA含量(liang)(liang)根據同等細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)(liang)的(de)細(xi)胞(bao)抽提和(he)逆轉錄大(da)致(zhi)界(jie)定, 如(ru)(ru)果提供(gong)(gong)RNA或cDNA我們要對(dui)(dui)您提供(gong)(gong)的(de)材料進行評估。

2.客戶提供(gong)盡(jin)可能(neng)詳細(xi)的背(bei)景(jing)信息(xi)；物種信息(xi)，擴增目(mu)的基(ji)因(yin)的NCBI登錄號等。

3.運輸要求，液氮(dan)或干(gan)冰保存寄送(song)。

注：樣(yang)本(ben)應避免各類污染和反復凍融。

提交的產品和資料：

1.RNA濃度及(ji)熒光定量(liang)PCR原(yuan)始(shi)數據及(ji)分(fen)析結果；

2.熒(ying)光定(ding)量PCR完整的實驗步驟(zou)、使用(yong)儀器、軟件設置參數等。